產品名稱 | 貓嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Chlamydophila felis |
貨號 | CP934062 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
貓嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產品:
二苯并噻吩-4-硼酸人心肌錨蛋白重復域1(ANKRD1)ELISA Kit,48T/96T
叔戊基苯人α肌動蛋白(α Actin)ELISA Kit,48T/96T
4--2,6-二氟苯醚人葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3)ELISA Kit,48T/96T
3,6-二羥基鄰苯二腈人肽酰脯氨酰異構酶(親環蛋白)樣1(PPIL1)ELISA Kit,48T/96T
酸麥芽酚酯人轉化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA Kit,48T/96T
三基-1,3-二胺人同源框B2(HOXB2)ELISA Kit,48T/96T
4-硝基苯酚鈉二水合物人皮膚蛋白(DPT)ELISA Kit,48T/96T
2-基喹啉人前列腺素D合成酶(PTGDS)ELISA Kit,48T/96T
1H-吲唑-6-羧酸酯人蛋白酸酶1調控/抑制因子亞基1A(PPP1R1A)
2-羥基苯醚人電子轉移黃素蛋白β肽(ETFB)ELISA Kit,48T/96T
BOC-D-2-苯氨酸人二酸尿核苷葡糖醛酸基轉移酶2家族肽B4
1-N-BOC-4-(4-基苯磺酰氧基)哌啶人酸甘油酸變位酶2(PGAM2)ELISA Kit,48T/96T
鹽酸雷尼替人黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA Kit,48T/96T
3-氨基-4-吡啶人CC趨化因子受體7(CCR-7)ELISA Kit,48T/96T
2-基-4-胺基-6-氧基均三嗪人TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit,48T/96T ASB2 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族2抗體茵陳(濱蒿)
ASB17 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族17抗體前胡(白花前胡)
ASB13 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族13抗體降香
ASB12 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體桃仁
ASB10 含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族10抗體餓螞蝗
貓嗜衣原體探針法熒光定量PCR檢測試劑盒ASAP3 GTP酶激活蛋白ASAP3抗體黃芩
ASAP1/DDEF1 發育分化增強因子1抗體紫菀
ASAM/ACAM 脂肪細胞特異性粘附分子抗體墨旱蓮
ASAH2 酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體瓦松
Aryl Hydrocarbon Receptor/AHR 芳香烴受體抗體相思子
ARTS1 脂肪細胞源性亮氨酸氨基肽酶抗體(血管內皮細胞生長因子誘導蛋白)狼(月腺大戟)
ARTS 凋亡相關蛋白TGFb信號抗體湖北貝母
Artemin Artemin抗體干蟾皮
ART5 二酸腺苷核糖基轉移酶5抗體千里光
ART4/CD297 二酸腺苷核糖基轉移酶4抗體仙鶴草
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
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