產品名稱 | 馬梭菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Clostridium equi |
貨號 | CP934078 |
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
探針法:
馬梭菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
應用案例:
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20 μL 體系,在樣品制備室進行)
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在銷售的產品:
5-基吡啶-2,3-二羧酸植物線粒體粗提分離試盒
[二]酸亞酯植物活性線粒體分離試盒
2-基酸酯植物高質純化線粒體分離試盒
(1S)-(-)-beta-蒎烯真菌/酵母細胞線粒體粗提分離試盒
1,3-二氨基-2-羥基烷真菌/酵母細胞活性線粒體分離試盒
5--2,4-二氟苯胺真菌/酵母細胞高質純化線粒體分離試盒
1-二十二烷純化線粒體蛋白質濃度定量測定試盒
1-BOC--2-酸動物血小板線粒體粗提分離試盒
3,3-二苯基烯腈動物血小板活性線粒體分離試盒
喹啉-2-硼酸動物血小板高質純化線粒體分離試盒
2,6-二基代酰苯胺動物全血線粒體粗提分離試盒
馬梭菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒3-氨基-4-吡唑動物全血活性線粒體分離試盒
N-酰基-2-咪唑烷酮動物全血高質純化線粒體分離試盒
5-氧基-2-硝基苯醛純化線粒體可溶性總蛋白制備試盒
鹽酸非那吡啶動物硬組織線粒體可溶性總蛋白制備試盒ALG11 天門冬酰胺連接糖基化11抗體熟地黃
ALF/GTF2A1LF 通用轉錄因子IIA樣因子抗體人工牛黃
Aldolase C 醛縮酶C抗體小茴香
Aldolase A 醛縮酶A抗體秦艽(小秦艽)
ALDOB 醛縮酶2抗體大葉紫珠
ALDH2/ALDHI 醛脫酶2抗體冬蟲夏草
ALDH1L1 醛脫酶1蛋白家族L1抗體杜仲
ALDH1B1 醛脫酶5抗體昆明山海棠
ALDH1A1 胞質醛脫酶1抗體細辛
ALDH16A1 醛脫酶16家庭A1抗體雪蓮花(天山雪蓮花)
ALDH1 醛脫酶1型抗體毛訶子
albumin/AFM 人血清白蛋白抗體水翁花
Albumin(3F4) 人血清白蛋白單克隆抗體烏梅
ALAS2/ALAS-E 5-氨基酰酸合酶1抗體牛大力(美麗崖豆藤)
ALAS1/ALAS-H 5-氨基酰酸合酶1抗體皂角刺
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
©2024 上海莼試生物技術有限公司 版權所有 備案號:滬ICP備17029297號-3 技術支持:化工儀器網 GoogleSitemap 總訪問量:102805 管理登陸